Ver: Introducción a Biología Molecular

Muestra: Ver Anexo: Toma de Muestra Biología Molecular.

Método:
· Reacción en cadena de la polimerasa o RT-PCR para la detección de RNA viral circulante. Transcripción inversa anidada(nested).
· TMA (Transcription Mediated Amplification ) determina la presencia del virus de la hepatitis C consta de tres etapas:

1) preparación de las muestras donde se libera el material genético de la partícula viral y se separa por hibridación sobre una partícula magnética
2) TMA se agregan primers y enzimas (transcriptasa reversa,T7 RNA –polimeraza ) y genera billones de amplicones RNA previo intermediarios doble cadena de DNA conteniendo la secuencia T7 promotor.
Resumiendo: se da la amplificación isotérmica del RNA con un intermediario de DNA doble hebra
3) detección de la amplificación hibridación con sondas marcadas con ester de acridina que permiten que se hibridizen al control interno y a los amplicones target .Luego una posterior oxidación hace que se genere una señal tipo flash para el control interno y una señal “lenta�para el material genético de la muestra. Tiene una sensibilidad de 5 IU/ml .es 10 veces mas sensible que las técnicas de PCR.

Significado clínico:
La mayoría de los pacientes con hepatitis crónica y anticuerpos persistentes tienen RNA circulante detectable por RT-PCR.
Algunos pacientes con infección aguda se tornan persistentemente negativo para la RT-PCR después de un período virémico inicial, esto sugiere que han eliminado satisfactoriamente la infección.
La persistencia de anticuerpos reactivos con el antígeno C100-3 se debe considerar indicativo de infección viral persistente.
En paciente sin evidencia de hepatitis crónica, una prueba ELISA de segunda generación firmemente positiva se correlaciona bien con la presencia del virus por RT-PCR. Los pacientes ELISA positivos de bajo riesgo con transaminasa (TGP) normal y una prueba confirmatoria negativa o indeterminada es menos probable que estén viremicos.
Una proporción importante de pacientes ELISA- positivos de grupos de alto riesgo que tienen un resultado indeterminado en la prueba confirmatoria, son viremicos por RTC-PCR.
La viremia no esta asociada con la presencia o ausencia de anticuerpos específicos detectables por RIBA los niveles de TGP o TGO no tienen valor predictivo de la viremia, porque estas son repetidamente normales en la mayoría de los pacientes con la viremia.

Utilidad clínica:

• Diagnóstico de infección aguda. Identificar la infección de HCV en individuos seronegativos. Detección de HCV-RNA en tejidos y PBMCS. Estudios de transmisión del virus de la hepatitis C (sexual, por fluidos biológicos).
• Monitoreo de la terapia:
  Análisis inicial y seguimiento de pacientes que están siendo tratados con Interferon Marcador predictivo a la respuesta del tratamiento.
• Evaluar la infección por HCV luego de un transplante
  Estudio de los pacientes seronegativos con hepatitis crónica, sobre todo aquellos inmunodeprimidos, en los que se sospecha la infección.
• Evaluación de la viremia en enfermos que poseen anticuerpos anti HCV, para descartar infección activa o inmunidad.

Confirma mas tempranamente la replicación viral y depuración de virus de la sangre.
Análisis de la variabilidad genética del HCV.VER HCV GENOTIPOS.

Bibliografía:

1. LotharT. Clinical Laboratory Diagnostics: Use and assessment of clinical laboratory results, English edition, 1998.
2. Tietz N. W. Clinical Guide to Laboratory test, edited by W.B. Saunders Company, third edition, United States of America ,1995.
3. Mandel, Bennett and Dolin. Enfermedades infecciosas principios y prácticas. Editorial Panamericana, 4ª edición; Madrid, España. Año 1997